Western Blotting技术之转膜

ningxueqin528

　　在蛋白免疫印迹实验中，转印是电泳之后的步骤。该步骤将蛋白从凝胶基质移动到合成膜支持物上，并与膜相结合，形成印迹。

　　电转印是蛋白免疫印迹中最常见的转印方法，即使用电场力驱动蛋白从凝胶中洗脱转移到膜上。此过程中，膜和凝胶放置在一起，并在两个电极之间放置滤纸。在电极之间施加电压，蛋白在电场力的作用下迁移到膜上。

　　电极之间产生的电场强度（以V / cm为单位测量）是实现转印的驱动力。电压及电极间距都会影响蛋白从凝胶中洗脱的速率。针对不同分子量的蛋白需要进行转印条件优化，以防止转印不足（蛋白不完全从凝胶中转移到膜上），或转印过度（蛋白穿透印迹膜造成损失）。

　　[url=http:///www.pall.cn/zh_cn/medical/oem-manufacturing.html]硝酸纤维素膜[/url]转膜流程：

　　1选择转印的方法及设备：可选择传统湿转、半干转或最新的快速半干转 方法。

　　2准备转印缓冲液及试剂：准备足够的转印缓冲液，用于转印槽以及凝胶、膜的预平衡。

　　3预平衡凝胶和膜：如有必要，用 转印缓冲液预先平衡凝胶和印迹膜。

　　4组装凝胶和膜的“三明治”：将凝胶和膜放置在被缓冲液浸湿的滤纸之间，做成转印“三明治”。

　　5转印过程：将“三明治”放入转印槽，并加入转印缓冲液，选择合适的转印条件，开始转印过程。